用于快速制備供免yi分析和電泳分離法使用的組織樣本

參考：R. H. ffrench-Constant/A. L. Devonshire, Biochemical Genetics, Vol. 25, Nos. 7/8, 1987.

MULTIPLE HOMOGENIZER多重均質(zhì)器（初設(shè)計(jì)用于昆蟲(chóng)樣本）可以同時(shí)制備96個(gè)組織樣本，將均質(zhì)化的時(shí)間減少了10倍。這樣一個(gè)人可可以在較短時(shí)間內(nèi)制備3000個(gè)用于免yi分析的樣本。

較早的方法耗時(shí)耗力，其使用帶有緊密排列玻璃棒的標(biāo)準(zhǔn)微離心管。當(dāng)量化形成蚜蟲(chóng)對(duì)殺蟲(chóng)劑抵抗力的酶的活動(dòng)時(shí)，這些方法限制了樣本的制備規(guī)模。

圖中展示了部件和組裝方法。將緩沖劑和樣本裝入微型培養(yǎng)皿的井內(nèi)，然后插入復(fù)式杵并按圓周手動(dòng)旋轉(zhuǎn)。

經(jīng)過(guò)上述過(guò)程并小心拔出杵后，丟失的量只有5 μl，而這與均質(zhì)量無(wú)關(guān)。因此，當(dāng)分別用10 μl和50 μul進(jìn)行均質(zhì)化后，可靠恢復(fù)的樣本分別為50％和90％。

分析過(guò)程所需的其他設(shè)備包括：專門(mén)的電泳凝膠體梳（與微型培養(yǎng)皿的坑相對(duì)應(yīng)）、8個(gè)位置的復(fù)吸液管、電泳柜和供電裝置。

用于快速制備供免yi分析和電泳分離法使用的組織樣本的多重均質(zhì)器

Alan Devonshire

對(duì)諸如昆蟲(chóng)等小生物體進(jìn)行的群體遺傳學(xué)研究需依靠電泳或免yi分析技術(shù)，其要求對(duì)眾多個(gè)體進(jìn)行分析方可保證結(jié)果的代表性。用于電泳分析的昆蟲(chóng)樣本通過(guò)各種均質(zhì)器進(jìn)行均質(zhì)化，比如帶有緊密排列的玻璃棒的聚丙烯微離心管。但是對(duì)單個(gè)昆蟲(chóng)均質(zhì)化后，利用微量注射器加載凝膠體的工作是整個(gè)分析過(guò)程中至耗時(shí)耗力的部分。當(dāng)免yi分析發(fā)展到要量化形成蚜蟲(chóng)對(duì)殺蟲(chóng)劑抵抗力的酶的活動(dòng)時(shí)，這種樣本制備方法的局限性就變得更加明顯了。

因此我們?cè)O(shè)計(jì)了可裝入標(biāo)準(zhǔn)免yi培養(yǎng)皿的多重均質(zhì)器，其可以同時(shí)均質(zhì)96個(gè)單獨(dú)樣本以用于免yi分析和電泳分離（ffrench-Constant & Devonshire, Biochemical Genetics, 25, 493－499（1987））。

該均質(zhì)器由10mm厚的塑料玻璃襯板制成，大小與免yi培養(yǎng)皿類(lèi)似。在均質(zhì)器內(nèi)有96個(gè)塑料玻璃棒按9mm的間距排列，與免yi培養(yǎng)皿內(nèi)的96個(gè)井準(zhǔn)確對(duì)應(yīng)。棒尖是水平的，與井的水平底部正好一致。

樣本被裝入免yi培養(yǎng)皿井內(nèi)的緩沖劑中，插入均質(zhì)器并手動(dòng)旋轉(zhuǎn)后將其均質(zhì)化。4mm直徑的棒較為理想，因?yàn)檫@樣即可以有效均質(zhì)化又可以在裝配后在井內(nèi)留下足夠的量（200 μl）。

要想確定均質(zhì)化過(guò)程中“丟失”的數(shù)量，可將不同量（10－200μl）的PBS/Tween以及蔗糖和溴甲酚紫放入免yi培養(yǎng)皿的8個(gè)井中，在經(jīng)過(guò)插入、旋轉(zhuǎn)、和拔出均質(zhì)器的杵后，利用復(fù)吸液管確定8個(gè)井中可以取回的樣本量。假設(shè)均質(zhì)器是小心拔出的，那么不管經(jīng)過(guò)均質(zhì)的樣本量如何，丟失的量均為 5μl。這樣當(dāng)別對(duì)10μl和50μl進(jìn)行均質(zhì)時(shí)，可靠恢復(fù)的樣本分別占50％和90％，涵蓋了對(duì)小生物體使用電泳分離法時(shí)的典型數(shù)量范圍。

如果要使用8通道復(fù)吸液管將樣本直接從免yi培養(yǎng)皿裝入盛有電泳分離凝膠體的井內(nèi)，則需要使用間隔為4.5或9mm的帶井梳。針對(duì)這一目的制作的間隔 4.5mm的梳（可從Burkard Scientific購(gòu)得）可以通過(guò)僅使用8通道吸液管的7個(gè)尖分兩次來(lái)填充不同的井，從而將免yi培養(yǎng)皿的兩行14個(gè)樣本裝載到Pharmacia GE-2/4設(shè)備（厚3mm，寬72mm）的每個(gè)凝膠體上。這樣在一個(gè)電泳箱內(nèi)就可以一次分析56個(gè)樣本。盡管吸液管尖過(guò)大，不適合Hoffer設(shè)備的 1.5mm凝膠體井，但也成功地使用該復(fù)吸液管將樣本裝入這種設(shè)備中（15井的梳，編號(hào)：SE 511－15，間隔9.1mm）。

從粉虱（50μg）到家蠅（20mg）的昆蟲(chóng)都可以被成功均質(zhì)化，但僅對(duì)蚜蟲(chóng)（約400μg）進(jìn)行過(guò)功效定量評(píng)估，用于通過(guò)免yi分析研究形成蚜蟲(chóng)對(duì)殺蟲(chóng)劑抵抗力的酶。使用多重均質(zhì)器制備的蚜蟲(chóng)樣本與與通過(guò)微型離心管制備樣本的相比，其得到的酶活動(dòng)更明顯（P<0.001），差異也更?。≒<0.001）。

除了更有效的均質(zhì)化外，樣本制備時(shí)間也只有采用微離心管進(jìn)行單獨(dú)均質(zhì)化所需時(shí)間的1／10。系統(tǒng)其他節(jié)省時(shí)間的方面包括：免yi培養(yǎng)皿的井淺并且?guī)Ь幪?hào)，故記錄樣本裝載數(shù)據(jù)更容易；樣本存儲(chǔ)于堆在冷凍機(jī)內(nèi)的培養(yǎng)皿內(nèi)；以及使用復(fù)吸液管進(jìn)行液體處理。如有可用于微型培養(yǎng)皿的離心機(jī)，則在分析前就可以去掉組織殘片。

隨著免yi分析在調(diào)查和診斷研究中作用的提升，該快速樣本制備技術(shù)對(duì)于與培養(yǎng)皿井內(nèi)的可用量（10－200μl）一致的組織將會(huì)有很多生物和醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用。若選用適當(dāng)?shù)氖?，則該技術(shù)也將非常適用于電泳分離研究。假設(shè)在梳井間隔方面沒(méi)有其他限制，那么生產(chǎn)商應(yīng)考慮采用標(biāo)準(zhǔn)的4.5或9mm間隔，這樣復(fù)吸液管就可以在樣本制備和裝載中得到更廣泛的應(yīng)用。

訂購(gòu)須知：

產(chǎn)品代碼	描述
BS00253	多重均質(zhì)器
BS01071	凝膠體梳
BS01072	復(fù)式吸液管
BS01073	電泳柜
BS01074	電源裝置

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